محلول تلطيخ TTC مع إيزشيميك أنسجة الحيوانات

TTC (2، 3، 5-ثلاثي فينيل كلوريد رباعي الألتروزيليوم) هو مركب حساس للضوء قابل للذوبان في الدهون. تم استخدام بقع TTC لتحديد مدى الإصابة بإيسكميا في الأنسجة. TTC هو ركيزة من ديهيدروجينز كمستقبلات البروتون من الإنزيم البيرودين-النيوكليوتيد لسلسلة التنفس. وهي تعمل مع ديهيدروجينز الأنسجة لتوليد مركبات حمراء. تحتوي أنسجة أيسكميا على نشاط منخفض لديهيدروجينز لا يتفاعل مع TTC ولا يترك لها أي بقع.  

الاستخدام:

1. اعزل عينة النسيج

يتم تخدير الحيوانات التجريبية. اعزل الأنسجة (مثل الدماغ والقلب) بسرعة، وضعها في -20 درجة مئوية للتجمد السريع لمدة تتراوح بين 20 و30 دقيقة. يمكن الاحتفاظ بعينات الأنسجة في -80 درجة مئوية لفترة قصيرة إذا لم تكن هذه العينات عاجلة.

2. قم بتحضير الجزء المتجمد

اترك كتلة النسيج المتجمدة تتجمد قليلاً. قسم كتلة النسيج إلى شرائح تسلسلية بسمك 2-3 مم مع شريحة ليكا اليدوية.

3. بقع TTC

انغمس في الشرائح في محلول تلطيخ TTC سابق التسخين، احتضنها لمدة 15 إلى 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع تجنب الضوء. قم بهز الشرائح برفق كل 5 إلى 8 دقائق لجعل حل البقع يلامس الشرائح بشكل موحد.

4) قم بالتقاط الصورة وتحليل النتيجة

أوقف تفاعل البقع بإضافة محلول التثبيت وحافظ على الشرائح في حالة داكنة. التقط صوراً للشرائح في اليوم التالي.

نتيجة البقعة:

تظهر الأنسجة الطبيعية باللون الأحمر بينما تظهر مناطق الإصابة باللون الأبيض المقزز.

التخزين والنقل:  صالح في 3 أشهر عند تخزينه في 4 درجات مئوية  واحتفظ به في الظلام.

1. استخدم عينات جديدة من دون إصلاح. يجب أن تكون الشرائح رقيقة وحادة. تحكم في وقت التجميد السريع بشكل صحيح لتسهيل عملية التقطيع. احتفظ بشرائح الشرائح مستوية.

2) تكون الشرائح الملونة صالحة في عدة أشهر عند الاحتفاظ بها في تثبيت المحلول وتجنب الضوء. قد تتلاشى الشرائح في ضوء الشمس.

3. يكون محلول التلسخ TTC صالحًا في شهر واحد عند الاحتفاظ به في 4 درجات مئوية وفي حالة داكنة. تأكد من استعادة درجة حرارة الغرفة العادية قبل الاستخدام.